کلون، بیان و سنجش آنزیمی ژن atp sulfurylase از یک سوش ایرانی باکتری ژئوباسیلوس

atp سولفوریلاز اولین آنزیم در مسیر احیاء سولفات، تولید آدنوزین فسفوسولفات را از atp و سولفات کاتالیز می کند. فعالیت atp سولفوریلاز در مسیر احیاء سولفات، که در بیوسنتز اسیدهای آمینه و دیگر متابولیت های دارای سولفات شرکت می کند به صورت گسترده ای مورد مطالعه قرار گرفته است. atp سولفوریلاز دارای کاربردهای زیادی می باشد از جمله می توان به تشخیص بیولومینومتریک adp در غلظت های بالای از atp، آشکارسازی مداوم فعالیت dna پلیمراز، توالی یابی dna و آشکارسازی باکتری ها اشاره کرد. در این تحقیق ژن atp سولفوریلاز از یک باکتری ایرانی سوش ژئوباسیلوس جدا و سپس در پلاسمید کلونینگ ptz57r/t و در باکتری e. coli dh5? کلون شد. پس از تعیین توالی در پلاسمید بیانی pet28a ساب کلون گردید و در باکتری بیانی e. coli bl21 بیان شد. ژن atp سولفوریلاز کلون شده دارای یک orf با طول 1161 جفت باز می باشد که یک پروتئین با 386 باقیمانده اسید آمینه ای کد می کند. توالی نوکلئوتیدی ژن و آمینو اسیدی پروتئین atp سولفوریلاز کلون شده به ترتیب 99% و 100% با توالی ژن atp سولفوریلاز geobacillus kaustophilus hta426 مشابهت داشت. پروتئین بیان شده با استفاده از ستون کروماتوگرافی تخلیص گردید. داشتن فعالیت آنزیمی برای پروتئین نوترکیب تولید شده با روش لومینسانس ارزیابی شد.